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动物布鲁氏菌病竞争ELISA抗体检测试剂盒
发布时间:2017-09-06|编辑:vns59859威尼斯城官网|能源科技有限公司

一、研发背景

布鲁氏菌病是由布鲁氏菌(Brucella)引起的以流产和发热为特征的人兽共患病,严重地威胁着人和多种动物的生命健康。世界动物卫生组织(OIE)将布鲁氏菌病列为B 类动物疫病,中华人民共和国动物防疫法将其列为二类动物疫病。随着动物养殖规模和肉类加工数量的增加,以及冷链物流称为一种趋势,布鲁氏菌病的传染以及病原大范围地传播称为一种潜在的威胁,因此布鲁氏菌病的诊断也显得越来越迫切。
布鲁氏菌病的检测方法主要有凝集试验、补体结合试验、荧光偏振试验和PCR检测等,但是这些方法在一定程度上都不及ELISA方法所具备的敏感性、特异性、方法标准化、稳定性、实验结果直接客观、可商品化为试剂盒等紧密联系生产实际的优点。另外,传统的血清学诊断方法常常出现假阳性血清反应而干扰诊断的判定。因此,在原有诊断方法的基础上,建立一种更加敏感和精确的布鲁氏菌病诊断方法,显得尤为重要。
悦洋的技术骨干通过长期的投入研究,经过坚持不懈地努力,在GMP车间验收成功之际,将建立的一种快速、高效、准确的动物布鲁氏菌病的诊断方法进行了工艺上的优化,进一步生产出了性能稳定的动物布鲁氏菌病竞争ELISA抗体检测试剂盒,在 产业化调试中取得了实质性进展。
该试剂盒使用了一种能与布鲁氏菌特异性结合的单克隆抗体,在布鲁氏菌病抗体检测中,该单克隆抗体能与布鲁氏菌产生的抗体特异地竞争,而与其他病原细菌的抗体无竞争性,特别是与布鲁氏菌有强烈交叉反应的小肠结肠炎耶尔森氏菌O:9和大肠杆菌O:157抗血清无竞争性,有效地解决了目前商品化布病竞争ELISA试剂盒无法区分小肠结肠炎耶尔森氏菌O:9和大肠杆菌O:157干扰的技术缺陷,提高了检测的特异性。本试剂盒使用了对猪、牛、羊均具有良好反应原性的猪种布鲁氏菌(S2株)脂多糖(LPS)作为包被抗原,不仅提高了LPS的产量,而且提高了检测的敏感性,同时做到用一个试剂盒检测多种动物布病抗体的目的。

二、试剂盒组分

商品名称:动物布鲁氏菌病竞争ELISA抗体检测试剂盒
主要组分:抗原包被板,阳性对照血清,阴性对照血清,单克隆抗体、HRP标记羊抗鼠IgG,羊抗鼠酶标抗体稀释液,样品稀释液,20倍浓缩洗涤液,底物显色液A,底物显色液B,终止液,封板膜,说明书。        

三、试剂盒的特点

该试剂盒具有简便、快速、灵敏、特异和高通量等特点,适合基层养殖人员和技术人员使用。
可用于检测牛、羊、猪等动物的布鲁氏菌血清抗体,有利于养殖场对该病的防控。
试剂盒重复性好,批间变异系数小,特异性良好,敏感性高。

四、试剂盒敏感性试验

将1:20稀释的由琥红平板试验和补体结合试验共同鉴定的阳性参考血清从1:2开始倍比稀释到1:32,每个稀释度分别取50μl加到抗原包被孔中,再加入50μl按照试剂盒稀释的单克隆抗体。阳性参考血清1:32倍稀释后其抑制率(PI)均≥30%。同时设强阳性血清对照、弱阳性血清对照、阴性血清对照和空白对照。每个样品均做2个重复孔。强阳性对照血清PI均在82%~103%;弱阳性对照血清PI均在33%~70%;阴性对照血清PI均在10%~15%;空白对照OD450nm在2.5~2.9之间。
将1:20稀释的由琥红平板试验和补体结合试验共同鉴定的10分布鲁氏菌阳性参考血清从1:20-1:2560倍比稀释后,用悦洋布鲁氏菌cELISA抗体检测试剂盒进行敏感性试验,结果检出阳性最大稀释倍数为640~1280(表1),表明试剂盒有很好的敏感性,符合临床诊断试剂盒的要求。        

表1 cELISA试剂盒对不同稀释度阳性血清的检测结果

五、试剂盒特异性试验

以小肠结肠炎耶尔森菌O:9、大肠杆菌O:157和沙门氏菌阳性血清,以及阴性参考血清10份,作为样品进行cELISA检测,验证试剂盒的特异性。
结果试剂盒检测小肠结肠炎耶尔森菌O:9、大肠杆菌O:157、沙门氏菌阳性血清,其PI均小于10%;检测牛布鲁氏菌阳性血清PI大于90%(表2);检测牛布鲁氏菌阴性血清的PI小于5%,全部为阴性(表3)。同时比对2个不同厂家生产的布病cELISA试剂盒,检测结果不能有效区分小肠结肠炎耶尔森菌O:9阳性血清及大肠杆菌O:157阳性血清(表4、表5)。因此,vns59859威尼斯城官网|能源科技有限公司生产的动物布鲁氏菌病竞争ELISA抗体检测试剂盒,可以用于布鲁氏菌抗体的临床检测。        

表2 悦洋布鲁氏菌病cELISA检测试剂盒特异性试验检测结果

注:2个阴性对照血清重复测定孔的平均OD450nm应≥2.0;2个阳性对照血清重复测定孔的平均OD450nm应< 0.2,且PI平均值应≥90%时,试验成立。PI=(阴性对照OD450nm-检测样品OD450nm)/阴性对照OD450nm×100%。结果判定:血清样本的PI≥30%时,判为阳性;当血清样本的PI< 30%时,判为阴性。

六、试剂盒重复性试验

随机抽取5份血清样本,做cELISA检测,验证试剂盒的重复性。批内重复性试验的CV值为1.5%~7.9%(表6);批间重复性试验的CV值为3.6%~9.0%(表7),批内重复性和批间重复性结果都符合规定的CV值小于15%的要求。        

表6  悦洋动物布鲁氏菌病cELISA批内重复性试验
表7 悦洋动物布鲁氏菌病cELISA批间重复性试验

与此同时,我们还做了针对不同动物的布鲁氏菌病抗体检测,试验结果表明,悦洋公司的动物布鲁氏菌病cELISA试剂盒可以检测猪、牛、羊的布鲁氏菌病抗体。
综上所述,悦洋公司的动物布鲁氏菌cELISA抗体检测试剂盒特点如下:
a.敏感性强,阳性血清用琥红平板试验和补体结合试验检测到的最大稀释度为
1:32,用本试剂盒检测相同的阳性血清,稀释640倍依然可以检测出结果;
b.可以做到一个试剂盒检测猪、牛、羊等不同动物的布鲁氏菌病抗体;
c.本试剂盒最大的特点就是有效地解决了目前商品化试剂盒无法区分小肠结肠
炎耶尔森氏菌O:9和大肠杆菌O:157抗体的短板,提高了检测的特异性;
d.批内和批间的重复性实验表明该产品重复性极好,CV值控制在10%以内。

七、总结

目前布鲁氏菌病在世界广泛传播,加上本病是人畜共患病,感染动物是人类的主要传染源,因此对布鲁氏菌病的准确检测,及时切断传染源,对养殖场的疫病防控以及阻断动物与人之间的传播有着重要的公共卫生意义。
用本试剂盒对临床上不同地区、不同动物的306份血清进行了检测,同时与其他几种检测方法相比较,结果再次证明,本试验方法较其他检测方法有更高的敏感性和特异性,并且与其他商品化的间接法ELISA试剂盒比较,可以排除革兰氏阴性细菌引起的假阳性。
vns59859威尼斯城官网|能源科技有限公司动物布鲁氏菌cELISA抗体检测试剂盒具有敏感性高、特异性好、操作简便、检测时间短,并可大批量检测等优点,很适合于布鲁氏菌病的临床监测,可以更精确的判定、更有效地对布鲁氏菌病进行监测、防控。帮客户解决农场存在的布鲁氏菌病难题,为动物种群的健康保驾护航。
悦洋致力成为全球动物疾病体外诊断新生代产业领导者,因此,我们的使命就是研发和生产出高品质的产品,提供高品质的服务,帮客户提升动物疾病防治水平,使动物和人健康,实现动物与人类和谐共生。

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